“FFPE DNA提取”你需要的，都在這里！

多年來，石蠟包埋切片技術一直是用于病理檢查的主要手段，隨著科學不斷發展，現代分子生物學技術越來越廣泛地被用于人類疾病研究的諸多領域，許多腫瘤都可以用基因及其蛋白質產物等在分子結構上的變化來解釋其病因和發病機制。新鮮或速凍樣本是DNA的重要來源，但是收集和維護它們的成本很高，因此無法廣泛獲得。1985年，Goelz等^[1]最先從石蠟包埋組織中提取出高質量的DNA，結束了DNA研究依賴于新鮮或速凍樣本的歷史，石蠟包埋組織DNA提取技術對腫瘤發生的分子機制的探討，診斷與研究等方面均具有重要價值。

石蠟包埋組織DNA的脫蠟方法有物理法，二甲苯脫蠟法，72℃保溫脫蠟法，TES溶液水浴脫蠟法等，目前ZUI常用的是二甲苯脫蠟法，但二甲苯是有毒試劑，是3類致癌物之一。ZYMO通過多年研發，推出了一款快速簡便且DU有的無毒脫蠟液的FFPE DNA提取試劑盒。

北京百奧創新科技有限公司提供此款試劑盒：

簡介：

FFPE DNA小量提取試劑盒為從福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織樣本和切片中高產量/高質量地分離DNA提供了一種簡單而可靠的方法。該產品的獨TE化學成分經過優化，可最大限度地回收非交聯、超純DNA，而且不會受到RNA污染。只需使用提供的蛋白酶K消化脫蠟組織，加熱，然后使用試劑盒中的Zymo-Spin柱純化DNA。PCR抑制劑在分離過程中被有效去除，洗脫的DNA是PCR、下一代測序、酶操作等的理想選擇。

操作流程示意圖：

優點：

提取效率比較：

使用本試劑盒與供應商Q Kit從同樣樣本中提取到的DNA進行實時PCR分析比較。如上圖的擴增曲線所示，使用本試劑盒分離的DNA始終產生較低的Ct值。

兼容不同片段提取：

本試劑盒選擇性分離DNA＞50bp或＞500bp的DNA，然后在1%瓊脂糖凝膠上進行分析。

提取步驟：

脫蠟：

1.盡可能多的從組織上去除石蠟，然后將樣品放置到一個1.5 ml離心管中。

注意：最多處理25 mg石蠟塊中的組織或最多4個組織切片（總表面積20mm²）建議處理1-2個切片

2.向樣品中加入400 μl脫蠟液，55°C孵育1分鐘，短暫渦旋。

3.除去樣品中的脫蠟溶液然后處理下一個切片。

組織消化：

1.針對離心管中去除了脫蠟液的組織樣品 (≤25 mg) ，加入以下混合物：

2.

3.將溫度調到94°C孵育20分鐘。然后加入5 μl RNase A，混勻，在室溫下再孵育5分鐘。

DNA純化：

1. 向離心管中加入350 μl Genomic Lysis Buffer，渦旋混勻。

2. 向樣品中加入135 μl異丙醇（自行準備）并混勻。≥ 12000×g離心1分鐘，去除不溶物。

3. 將上清液轉移到Zymo-Spin? IICR柱中，Zymo-Spin? IICR柱套在一個收集管里，10000×g離心1分鐘。

4. 將Zymo-Spin? IICR柱套在一個新的收集管中，加入400 μl Genomic DNA Wash 1，10000×g離心1分鐘。棄掉收集管中的廢液。

5. 向Zymo-Spin? IICR柱中加入700 μl Genomic DNA Wash 2，≥ 12000×g離心1分鐘。棄掉收集管中的廢液。

6. 向Zymo-Spin? IICR柱中加入200 μl Genomic DNA Wash 2，≥ 12000×g離心1 分鐘。

7. 將Zymo-Spin? IICR柱轉移到干凈的微量離心管中。加入≥ 50 μl DNA Elution Buffer或水（如果采樣25 mg組織，添加≥ 100 μl）到柱基質上。室溫下放置 2-5 分鐘。

8. 全速離心30秒以洗脫 DNA。

洗脫的DNA可立即用于基于分子的應用或儲存在≤-20oC以備將來使用。

[1] GOELZ SE, HAMILTON SR, VOGELSTEIN B. Purífication of DNA from formaldeyde fixed and paraffin-embedded tissues[J].Biochem Biophys Res Commun, 1985, 130(1):118-126.